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常见问题 / FAQ
关于胎牛血清使用与技术的常见问题解答
血清的颜色取决于血红蛋白浓度,而该参数的差异不会影响血清的性能。
a.反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊,可通过分装成单次用量减少冻融来尽量避免此种情况。 b.血清是在低温环境下迅速加工以保持其生长特性,血清中遗留的一些纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白。过量的纤维蛋白在血清中呈现为可见的絮状物质,可通过 400xg 离心移除。不建议通过过滤血清来移除絮状物质,因为滤器可能堵塞,或者意外截留到重要的蛋白质。 c.磷酸钙在显微镜观察为小黑点,由于布朗运动,通常被误认为是微生物污染。血清中的沉淀往往比较难以预测和控制,但幸运的是这些沉淀不会影响血清的质量。
两者采血的供体牛龄不同,胎牛血清是通过对未出生的胎牛心脏穿刺取血获得的血清,而小牛血清是采集自出生后 1 年内的小牛静脉取血。两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例有所不同,可根据培养的细胞类型选择合适的血清。
血清采集后冷冻运输至加工工厂,解冻并检测细菌、病毒、内毒素和血红蛋白含量等多项指标。选择最优质的血清在无菌环境下进行系列膜过滤无菌处理,然后在无菌环境下进行分装并快速冻存于 -20°C,在所有批次验证达到或超过 QC 标准之前隔离存放。
推荐储存于 -20°C,使用前的冻存状态是最稳定的。血清不建议储存于无霜冰箱,因为温度循环可能导致瓶体破裂,使产品污染或变质。研究表明储存在 -80°C 下的血清在性能方面没有任何变化,但解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生,故不建议 -80°C 储存。血清在 4°C 冰箱存放时间切勿超过 1 个月。若一次无法用完 1 瓶,建议分装后保存,避免反复冻融,另血清结冰体积会增加约 10%,请预留一定的体积空间。
以 500ml 血清为例,4℃冰箱过夜解冻。在融化过程中要慢慢摇动瓶身,使血清混匀,但摇动中尽量不要产生泡沫。温度超过 37°C 时会降解营养成分,破坏血清功能。
血清是干冰包装运输,到达时应该是冷冻状态。但是,如果由于运输时间超期导致部分解冻,依然可以继续使用。完全解冻后分装成单次用量进行冻存。
如果正确无菌操作,添加血清的培养基可以在 2-8°C 最长储存 6 周。不论储存时间长短,一旦培养基变得浑浊,应该使用适当的方法丢弃。
胎牛血清一般不推荐热灭活。热灭活是指在做免疫相关的试验中,通过加热灭活掉血清中的补体,以避免对免疫试验的影响。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。并且,热灭活可能导致胎牛血清中部分重要的生长因子的活性衰减,进而影响细胞培养效果。一般在一些特殊的免疫学应用,培养昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。热灭活方法是在 56°C 水浴中处理 30 分钟,并每隔大约 10 分钟旋转一次瓶子。
a.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。 b.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。 c.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。 d.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 e.起酸碱度缓冲液作用。 f.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。 g.参与细胞冻存。
a.精选内毒素更低批次 (5EU/ml),原装进口。每个批次产量 800-2000 升,试用满意的实验室批号优先锁定,保证大多数项目两年不需换批次,细胞试验数据稳定。 b.新批次在使用前,提供试用服务,养细胞更放心。 c.每年按厂家生产顺序,会有多批次平行供应,每个实验室专属批号管理,保证供货稳定。 d.VACCA 胎牛血清具有完整的检测报告,为各类项目的申报提供支持。 e.针对特殊科研项目,可提供 3-5 个平行批次,让试验人有更多选择空间。 f.为储存空间不足的实验室提供可靠的血清仓储保护,按要求随时发货。 g.免费无忧售后,所有实验室签收的 VACCA 特级胎牛血清,未开封未融化、不影响二次销售的情况下,均可享受无条件换货的售后保障。 h.免费专业帮助,汇集近二十年,千万个血清用户细胞培养经验,为各种细胞培养提供问题梳理分析,解决方案参考。
碳吸附胎牛血清的生产过程包括使用活性炭和右旋糖苷来去除 FBS 中的激素。碳吸附胎牛血清可用于细胞的体外培养,去除激素背景以验证激素对细胞生长的的作用效果,从而验证激素的功能。研究内容包括类固醇受体连接、细胞受体类固醇调节、各种组织激素的分泌以及甲状腺激素功能。
采用切向流透析过滤去除 10000D 以下的小分子,可显著降低小分子物质的浓度,如氨基酸、激素和细胞因子等,避免外源小分子对细胞生长产生干扰,同时避免血清蛋白的沉淀。常用于蛋白质组学的研究 (如质谱分析),适用于脉冲示踪实验 (如利用同位素标记特定小分子,并加入到培养体系中,研究细胞的代谢),细胞信号传导和报告基因分析等。
通过固体基质脱脂,脱脂后的 FBS 脂质物质 (包括内源性脂质、磷脂、甘油三酯、脂肪酸、游离脂肪酸和胆固醇等) 水平较低,适用于研究脂质敏感细胞系、脂质代谢和动脉粥样硬化等。
天然来源的胎牛血清会含有大量的外泌体等囊泡成分,这些囊泡中可能包含牛蛋白和各种 RNA。在研究细胞自身分泌至细胞外的小泡或进行下游 RNA 分析时,胎牛血清中的外泌体可能会引起严重的背景问题,从而影响或干扰结果的判断,因此,必须使用去除外泌体后的胎牛血清进行细胞培养。
使用试剂盒和高效液相色谱测量若干个个批次特级胎牛血清的四环素含量,选择不含四环素的批次作为四环素阴性胎牛血清。研究人员在使用敏感的四环素诱导调控系统时,总是会遇到意想不到的基因表达问题,为了确保精确的基因表达,胎牛血清中四环素的含量越低越好。VACCA 四环素阴性胎牛血清四环素的检测含量约为 0.001ug/ml,可应用于使用敏感四环素诱导表达系统的细胞培养和其他四环素敏感实验。
使用 A-琼脂糖处理特级胎牛血清可以保留血清的原始生物活性,同时将其中的 IgG 含量降低到 5ug/ml 以下。低蛋白胎牛血清广泛用于细胞培养和生物医学研究,特别适用于需要减少免疫球蛋白 G(IgG) 干扰的实验和需要低蛋白细胞培养条件的研究。
在某些细胞培养应用中,马血清可作为 FBS 的替代物。马血清成分与 FBS 成分不同,且免疫球蛋白水平低于 FBS。马血清也可以作为补充剂与胎牛血清配合使用促进细胞生长。它是促进肿瘤细胞系尤其人肿瘤细胞系生长的理想补充剂,还可用作细菌培养基补充剂,促进那些对营养要求较高的生物生长。
大部分血清产品,在未开封并冻存的情况下保质期为生产之日起 5 年,具体可参考瓶身或 COA 上的信息。
血清是从生物来源提取的,个体不同会导致其成分会存在批次之间的差异。为了尽可能减少应用变化,我们对每个批次均执行严格的质量检测,使用高质量标准,尽可能确保批间一致性。
血清出厂前,需要进行严格的检测,符合规定数值方能出厂,主要指标包括:pH(6.7-8.2)、渗透压 (260-340mosm/kg)、血红蛋白含量 (<20mg/dL)、总蛋白含量 (30-50g/L)、白蛋白含量 (14-34g/L)、IgG(<250ug/mL)、内毒素含量 (<15EU/mL)、无菌检测 (阴性)、病毒检测 (阴性)、抗体检测 (阴性) 等。
